D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinova, L. Yu. Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev
Colletotrichum coccodes- ի ֆիտոպաթոգեն բորբոսը վտանգավոր հիվանդություններ է առաջացնում կարտոֆիլում և լոլիկում, որոնք հայտնի են որպես սիբիրախտ և պալարային սեւ կետ: Ձևաբանական բնութագրերով, դրանք հաճախ դժվար է տարբերել այլ միկրոօրգանիզմների կողմից առաջացած հիվանդություններից. կանաչ լոլիկի մրգերի վրա հիվանդությունը կարող է լինել ասիմպտոմատիկ ՝ արտահայտվելով միայն հասած կարմիր մրգերի վրա: Պաթոգենի արագ և ճշգրիտ ախտորոշման համար առաջարկվում է իրական ժամանակում PCR թեստային համակարգ: Փորձարկման համակարգ մշակելու համար որոշվեց Ռուսաստանի տարբեր շրջաններում կարտոֆիլի պալարներից մեկուսացված 45 C. coccodes շտամների գլիցերինի տրիֆոսֆատդեհիդրոգենազային գենի նուկլեոտիդային հաջորդականությունը:
Ձեռք բերված արդյունքների և GenBank տվյալների շտեմարանում առկա այլ տեսակների նման հաջորդականությունների վերլուծության հիման վրա մշակվել են տեսակների համար հատուկ նախաներկեր և զոնդ C. coccodes- ի համար: Ստեղծված փորձարկման համակարգի առանձնահատկությունը ստուգելու համար PCR- ն իրականացվել է լոլիկի և կարտոֆիլի բույսերի (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis Phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani, Colletotrichum coccodes) 15 տարբեր տեսակների մակաբուծական և սապրոտրոֆ սնկերի մաքուր մշակույթներից մեկուսացված ԴՆԹ-ով: Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis Phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides): Colletotrichum կոկոդների ԴՆԹ-ի առկայությունը որոշվել է 20–27 շեմային ցիկլում, իսկ մյուս տեսակները հայտնաբերվել են 40 ցիկլից հետո կամ չեն հայտնաբերվել: Թեստային համակարգը հնարավորություն է տալիս հուսալիորեն հայտնաբերել C. coccodes ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիաները վերլուծված PCR խառնուրդում 0.01 նգ / մմ 3-ից ավելի: Օգտագործելով մշակված թեստային համակարգը, ուսումնասիրվել է սնկային հիվանդությունների ախտանիշներով լոլիկի տերևներում C. կոկոդների առկայությունը և կարտոֆիլի պալարներում ՝ առանց հիվանդության արտաքին ախտանիշների: Սնկային ինֆեկցիայի ախտանիշներով տերևները հավաքվում էին Կրասնոդարի երկրամասի երկու տարբեր դաշտերից, պալարները ՝ Կոստրոմայի, Մոսկվայի, Կալուգայի, Նիժնի Նովգորոդի մարզերի դաշտերից: Կրասնոդարի երկրամասում հայտնաբերվել է լոլիկի մեկ տերև, որը պարունակում է C. coccodes ԴՆԹ. այս պաթոգենի ԴՆԹ-ի զգալի ներկայությունը հայտնաբերվել է Կոստոմայի, Մոսկվայի, Կալուգայի շրջաններում աճեցված պալարների 5 նմուշներում:
Ներածություն
Colletotrichum սեռի սնկերը վտանգավոր ֆիտոպաթոգեններ են, որոնք ազդում են հացահատիկային մշակաբույսերի, բանջարեղենի, խոտաբույսերի, բազմամյա մրգերի և հատապտուղների բույսերի վրա: Այս սեռի ամենատարածված տեսակներից մեկը ՝ Colletotrichum coccodes (Wallr):
Հյուզը սիբիրախտի և կարտոֆիլի և լոլիկի սեւ կետի հարուցիչն է և առաջացնում է Solanaceae ընտանիքի մի շարք այլ բույսերի հիվանդություններ, ներառյալ մոլախոտեր (Dillard, 1992): C. coccodes- ը ազդում է բույսի բոլոր ստորգետնյա մասերի, ցողունային հիմքերի, տերևների և պտուղների վրա (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994): Վարակված կարտոֆիլի պալարների կեղեւի վրա նկատվում է անորոշորեն արտահայտված եզրերով մոխրագույն բծերի զարգացում, որոնց վրա հստակ երեւում են սպորուլյացիայի և մանրադիտակների սեւ կետերը: Պահպանման ընթացքում փափկեցրած պարունակությամբ խոցերը կարող են առաջանալ պալարների պալպում, այսինքն. հիվանդությունը մտնում է սիբիրախտի փուլ, որը, սակայն, չափազանց հազվադեպ է:
Միևնույն ժամանակ, լոլիկի մրգերի վրա բնորոշ են սիբիրախտի ախտանիշները (մաշկի փոքր խոցերով մաշկի խոցեր): Տերեւների վրա C. coccodes- ի ախտանիշները հայտնվում են որպես մուգ շագանակագույն բծեր, որոնք սովորաբար սահմանակցվում են դեղին հյուսվածքով (Johnson, 1994):
Պալարների վրա սեւ կետի զարգացումը փչացնում է նրանց տեսքը, ինչը հատկապես արտահայտվում է կարմիր կեղևով լվացված կարտոֆիլ վաճառելիս: Կեղևի շերտազատումը հանգեցնում է ավելորդ գոլորշիացման և պահեստի կորուստների ավելացմանը (Hunger, McIntyre, 1979): Բույսերի այլ օրգանների վնասը բերում է բերքատվության կորուստների, ինչը նշվել է և՛ բաց, և՛ փակ գետնին (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999): C. coccodes- ի պատճառած հիվանդությունները տարածված են աշխարհի գրեթե բոլոր կարտոֆիլ արտադրող շրջաններում, ներառյալ Ռուսաստանը (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al, 2018): Այս հիվանդությունների վերահսկումը դժվարանում է C. coccodes- ի դեմ առկա ֆունգիցիդների անբավարար արդյունավետության և դիմացկուն սորտերի բացակայության պատճառով (Read, Hide, 1995):
C. coccodes- ի պատվաստանյութը կարող է պահպանվել սերմնաբջջի մեջ (կարդա, թաքցրեք, 1988 թ., Sonոնսոն և ուրիշներ, 1997 թ.), Լոլիկի սերմերը (Բեն-Դանիել և ուրիշներ, 2010 թ.), Երկար ժամանակ գոյատևեն հողի մեջ, բույսերի բեկորների վրա (Dillard, 1990 ; Dillard, Cobb, 1993) և մոլախոտերի մեջ (Raid, Pennypacker, 1987): Մի շարք հեղինակների (Կարդալ, թաքցնել, 1988 թ., Բարկդոլ, Դեյվիս, 1992 թ., Sonոնսոն և այլք, 1997 թ., Դիլլարդ, Կոբբ, 1993 թ.) Աշխատանքները ցույց են տվել, որ կարտոֆիլում և լոլիկում հիվանդության զարգացումը մեծապես կախված է սերմերում պատվաստանյութի առկայությունից և հող Հետևաբար, հիվանդությունից կորուստները նվազագույնի հասցնելու համար անհրաժեշտ է ախտորոշել (ներառյալ քանակական) սնկերի սերմերը նյութում, հողում, կարտոֆիլի պալարներում և պահեստավորման համար դրված լոլիկի սերմերում: Հողի և բուսական նյութերի ձևաբանական ախտորոշումը կարող է իրականացվել միայն միկրոսկլերոտիայի առկայությամբ, որը, սակայն, հանդիպում է նաև սնկերի այլ տեսակների մեջ:
Պալարների վրա ախտանշանները շատ նման են Helminthosporium solani բորբոսի կողմից առաջացած արծաթե կեղևին: Colletotrichum կոկոդների և Helminthosporium solani- ի մեկուսացումը մաքուր մշակույթի մեջ բավականին բարդ է և երկար ժամանակ է պահանջում `սննդարար միջավայրի դանդաղ աճի պատճառով: Colletotrichum կոկոդներն արագորեն բացահայտելու համար անհրաժեշտ է օգտագործել գործիքային ախտորոշիչ մեթոդներ: Ամենահարմար մեթոդը պոլիմերազային շղթայական ռեակցիան է (PCR) և դրա փոփոխումը `իրական ժամանակում PCR: Ներկայումս Եվրոպայում և Միացյալ Նահանգներում օգտագործվում է բրիտանացի հետազոտողների (Cullen et al., 2002 թ.) RDNA ITS1 տարածաշրջանի համար մշակված փորձարկման համակարգը: Դրա օգտագործումը լավ արդյունքներ է ցույց տվել ռուսական մեկուսարանների վերլուծության մեջ (Belov et al, 2018): Այնուամենայնիվ, C. coccodes- ը խիստ փոփոխական է, և դրա հայտնաբերումը ԴՆԹ-ի մեկ հաջորդականությունից կարող է հանգեցնել կեղծ բացասական արդյունքների: Ավելի հուսալի ախտորոշման համար անհրաժեշտ է վերլուծել մի քանի տեսակների համար հատուկ ԴՆԹ-ի հաջորդականություններ, որոնց կապակցությամբ մենք մշակել ենք բնօրինակ փորձարկման համակարգ, որը թույլ է տալիս մեզ բացահայտել C.coccodes- ը `գլիցերալդեհիդ-3-ֆոսֆատ dehydrogenase գենի հաջորդականությամբ:
նյութեր եւ մեթոդներ
Ստեղծված փորձարկման համակարգերի արդյունավետությունն ու առանձնահատկությունը գնահատելու համար մենք օգտագործել ենք 15 տեսակի սնկերի մաքուր մշակույթներ, որոնք հեղինակները մեկուսացրել են լոլիկի տերևների և մրգերի, կարտոֆիլի պալարների հիվանդ նմուշներից (աղյուսակ 1): Մեկուսացման համար մենք վերցրեցինք սնկային վարակի ախտանիշներով բույսերի օրգաններ `մեկ թփի համար ոչ ավելի, քան մեկ օրգան:
Պալարի մի կտոր կեղևով, տոմատի մրգի կտոր և տուժած տերևը դրեցին հեռադիտակի մանրադիտակի տակ, որից հետո միկելիումը, սպորները կամ հյուսվածքի մի կտորը տեղափոխեցին ագարի միջավայր (սալոր ագար) Petri- ի սրված կտրող ասեղով: Մեկուսիչները պահվում էին ագարի թեքության վրա փորձանոթներում 4 ° C ջերմաստիճանում:
Լոլիկի տերևների նմուշները սնկային հիվանդությունների ախտանիշներով, որոնք նախատեսված են վերլուծությունից անմիջապես հետո (դաշտում) վերլուծության համար, տեղադրվել են 70% էթիլային սպիրտի մեջ, որում դրանք պահվում էին մինչև ԴՆԹ-ի մեկուսացումը: Կարտոֆիլի պալարները հասցվել են լաբորատորիա, դրանցից մաքրվել կեղևից (2 × 1 սմ կտոր) և սառեցվել –20 ° С- ում: Պահվում է սառեցված մինչև ԴՆԹ-ի մեկուսացումը:
ՍՆԿ-ների մաքուր մշակույթները ԴՆԹ-ի մեկուսացման համար աճեցվել են հեղուկ սիսեռ միջավայրում: Սնկերի միկելիումը հանվեց հեղուկ միջավայրից, չորացրեցին ֆիլտրի թղթի վրա, սառեցրեցին հեղուկ ազոտի մեջ, համասեռացվեցին, ինկուբացվեցին CTAB բուֆերում, մաքրեցին քլորոֆորմով, նստեցրեցին իզոպրոպանոլի և 0.5 Մ կալիումի ացետատի խառնուրդով, երկու անգամ լվացվեցին 2% սպիրտով: Արդյունքում ստացված ԴՆԹ-ն լուծարվեց deionized ջրի մեջ և պահվեց –70 ° C ջերմաստիճանում (Kutuzova et al., 20): ԴՆԹ-ի կոնցենտրացիան չափվել է ՝ օգտագործելով HS DNA ԴՆ քանակականացման համար կրկնակի շղթայական ԴՆԹ-ի համար Qubit 2017-ում (Qiagen, Գերմանիա): Ալկոհոլիզացված և սառեցված նմուշները մանրացված են հեղուկ ազոտի մեջ, այնուհետև կատարվել է ԴՆԹ-ի արդյունահանում, ինչպես նկարագրված է վերևում (մաքուր սնկային մշակույթների միցելիումի համար):
Աղյուսակ 1. Օգտագործված սնկերի շտամների ծագումը
Սնկով անունը | Բույս, օրգան | Ընտրության վայրը |
---|---|---|
Colletotrichum կոկոդներ 1, C. կոկոդներ 2, C. կոկոդներ 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | կարտոֆիլի պալար | Կոստրոմայի մարզ, 1-ին դաշտային սերնդի կարտոֆիլի պալարներ, Red Scarlett սորտ |
Colletotrichum կոկոդներ 4 | կարտոֆիլի թերթ | Rep. Մարի Էլ, Յոշկար-Օլա |
Helminthosporium solani | կարտոֆիլի պալար | Մագադանի շրջան, պոզ. Վրան, կարտոֆիլի պալար |
Cladosporium fulvum | լոլիկի տերև | Մոսկվայի մարզ, խոշոր պտղատու լոլիկ |
Alternaria tomatophila | լոլիկի մրգեր | հանձնվել է բույսերի պաշտպանության համառուսական հետազոտական ինստիտուտի մկոլոգիայի և ֆիտոպաթոլոգիայի լաբորատորիայի աշխատակիցների կողմից |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | լոլիկի մրգեր | Կրասնոդարի երկրամաս, Կրիմսկի շրջան, կրեմի դասարան |
Fusarium oxysporum | ցորենի արմատ | Մոսկվայի շրջան |
PCR- ն իրականացվել է DTprime ուժեղացուցիչի վրա (ԴՆԹ-տեխնոլոգիա): PCR- ի համար օգտագործվել են բնօրինակի նախածանցներ և գլիցերինի տրիֆոսֆատդեհիդրոգենազային գենի տեսակների հատուկ տարածաշրջանի հետաքննություն. Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, նախնական այբբենարան Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGGT1): Նախաներկերն ուժեղացնում են 213 bp շրջանը:
Ռեակցիայի համար պահանջվեց 50 նգ ընդհանուր ԴՆԹ (տերևներն ու պալարները վերլուծելիս) և 10 նգ (մաքուր սնկային մշակույթների ԴՆԹ վերլուծելիս): Արձագանքի խառնուրդը (35 μl) պարաֆինային շերտով բաժանվել է երկու մասի. 20), յուրաքանչյուր դեզօքսինուկլեոտիդային տրիֆոսֆատի 2 մմ, յուրաքանչյուր այբբենարանի 10 pmol և հիդրոլիզացվող լյումինեսցենտային զոնդի 750 pmol; վերինը պարունակում էր 8.8 μl 200 × PCR բուֆեր և 4 U Taq պոլիմերազ:
Պարաֆինի հետ խառնուրդի տարանջատումը թույլ է տալիս երկար ժամանակ պահել խողովակները 5 ° C ջերմաստիճանում և ապահովել PCR- ի տաք սկիզբ `դրանք 10 րոպե տաքացնելուց հետո 80 ° C- ից բարձր ջերմաստիճանում: PCR- ն իրականացվել է հետևյալ ծրագրի համաձայն. 94.0 ° C - 90 s (1 ցիկլ); 94.0 ° C - 30 վ; 64.0 ° C - 15 վ (5 ցիկլ); 94.0 ° C - 10 վ; 64.0 ° C - 15 վ (45 ցիկլ); 10.0 ° C - պահեստ:
Արդյունքներ և քննարկում
Գլիցերինի տրիֆոսֆատդեհիդրոգենազի գենի հաջորդականությունները որոշվել են Ռուսաստանի տարբեր մարզերում տերևներից, ցողուններից, կարտոֆիլի պալարներից և լոլիկի մրգերից մեկուսացված 45 շտամներում (Կուտուզովա, 2018): Բոլոր շտամների ուսումնասիրված հաջորդականությունները բաժանվել են 2 խմբի ՝ տարբերվելով երկու նուկլեոտիդներով: Երկու խմբերի ներկայացուցիչների նուկլեոտիդային հաջորդականությունները KY496634 և KY496635 համարների տակ պահվում են GenBank- ում:
Coc70gdf, coc280gdr և cocgdz զոնդերը, որոնք հիմնվել են դրանց հիման վրա, ստուգվել են BLAST ծրագրի միջոցով (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) Colletotrichum սեռի և այլ օրգանիզմների Gencer- ի տվյալների բազայում առկա գլիցերինի տրիֆոսֆատ դեհիդրոգենազի գենի բոլոր հաջորդականությունների վրա:
Նախաներկներին և զոնդերին այլ օրգանիզմների ԴՆԹ-ի ոչ մի շրջան չի հայտնաբերվել:
Փորձարկման համակարգի զգայունությունը ստուգվել է ՝ օգտագործելով C. coccodes ԴՆԹ-ի տարբեր կոնցենտրացիաների նմուշներ, անտրակտոզով վարակված կարտոֆիլի տերևի ԴՆԹ (հավաքվել է 2017 թ.-ին Մարի Էլում, Կարմիր Scarlett բազմազանություն) և պալարների կեղև, որոնք ազդել են սեւ կետի վրա բազմազանություն Red Scarlett, աղյուսակ 2): Պալարներում և կարտոֆիլի տերևներում ԴՆԹ-ի առկայությունը հաստատելու համար դրանցից C. coccodes շտամները մեկուսացվել են մաքուր մշակույթների մեջ:
Թեստային համակարգի զգայունության վերլուծության արդյունքները ցույց են տալիս, որ այն կարող է օգտագործվել հաջողությամբ ախտորոշելու համար նմուշում C. coccodes ԴՆԹ, եթե դրա ընդհանուր պարունակությունը PCR խառնուրդում ավելի քան 0.05 նգ է: Դա միանգամայն բավարար է հայտնաբերելու համար, քանի որ մեկ սկլերոտիան պարունակում է միջինում 0.131 նգ, իսկ մեկ սպորը պարունակում է մոտ 0.04 նգ ԴՆԹ (Cullen et al., 2002): Անգլիական խմբի կողմից մշակված թեստային համակարգը (Cullen et al., 2002) ցույց տվեց նման զգայունություն (շեմի ցիկլ 34-ը 0.05 նգ ԴՆԹ-ի և 37-ը 0.005 նգ-ի վրա):
C. coccodes պարունակող բնական նմուշների վերլուծությունը բոլոր դեպքերում հնարավորություն է տվել հուսալիորեն պարզել դրա առկայությունը նմուշում (աղյուսակ 2): ԴՆԹ-ի մեկուսացման առաջարկվող մեթոդը կիրառելի էր նաև բնական բույսերի նմուշների վերլուծության համար:
Աղյուսակ 2. Իրական ժամանակում PCR- ի համար Colletotrichum կոկոդների նույնականացման համար առաջարկվող փորձարկման համակարգի զգայունության որոշում
Նմուշ | Նմուշում ԴՆԹ-ի քանակը *, նգ | Շեմային ցիկլ | C. կոկոդների հայտնաբերում |
---|---|---|---|
Mycelium Colletotrichum կոկոդներ | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
Պալարի կեղեւ 1 | 50 | 32 | + |
Պալարի կեղեւ 2 | 50 | 30 | + |
Պալարի կեղեւ 3 | 50 | 31.5 | + |
Կարտոֆիլի տերև | 50 | 29.5 | + |
Նշում. * PCR արտադրանքի խառնուրդում:
Թեստային համակարգի առանձնահատկությունը ստուգվել է 15 տեսակի սնկից արդյունահանված ԴՆԹ նմուշների վրա: Հեղինակները սնկերի բոլոր շտամները մեկուսացրել են տոմատի, կարտոֆիլի պալարի ազդակիր և առողջ պտուղներից և տերևներից. մեկ շտամը մեկուսացվել է ցորենի արմատից (աղյուսակ 1): Պտղի մակերեսից մեկուսացվածների մեջ կան տեսակներ, որոնք պաթոգեն չեն լոլիկի համար (օրինակ ՝ Phellinus ferrugineovelutinus):
Ուսումնասիրությունները ցույց են տվել, որ C. coccodes ԴՆԹ-ն հայտնաբերվել է 20–27 շեմային ցիկլում, իսկ մյուս սնկային տեսակները չեն հայտնաբերվել կամ ազդանշան են տվել 40 ցիկլից հետո, ինչը կարող է վերագրվել ոչ սպեցիֆիկ աղմուկի ազդեցությանը (Աղյուսակ 3):
Աղյուսակ 3. Տարբեր տեսակի սնկերի փորձարկման համակարգի ստուգում
Սնկով անունը | Շեմային ցիկլ |
Colletotrichum կոկոդներ 1 | 20.9 |
C. կոկոդներ 2 | 22.6 |
C. կոկոդներ 3 | 23 |
C. կոկոդներ 4 | 22 |
Fusarium oxysporum | > 40 |
F. verticalillium | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
Phomopsis Phaseoli | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
A. տոմատոֆիլա | > 40 |
Helminthosporium solani | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
Stemphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Կլադոսպորիումի կլադոսպորիոիդներ | > 40 |
C. fulvum | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
penicillium SP. | > 40 |
Նշում. * Բոլոր նմուշներում ԴՆԹ-ի քանակը 10 նգ էր:
Մշակված փորձարկման համակարգը օգտագործվել է լոկոմատի տերևի նմուշներում C. coccodes- ի նույնականացման համար `նեկրոտրոֆիկ հարուցիչների և սերմացու կարտոֆիլի պալարների ախտանիշներով` առանց տեսանելի ախտանիշների: Ուսումնասիրության համար մենք վերցրեցինք տարբեր սորտերի սերմնաբջիջներ, որոնք աճեցվել են Կոստրոմայի, Մոսկվայի, Կալուգայի, Նիժնի Նովգորոդի մարզերում: Նմուշներում նշանակալի է համարվել C. coccodes ԴՆԹ-ի առկայությունը, որի վերլուծության ժամանակ շեմի ցիկլը չի գերազանցում 35-ը: Այս շեմի արժեքն ընտրվել է հիմնվելով 0.05 նգ C. coccodes ԴՆԹ-ի հուսալի որոշման վրա (շեմի ցիկլ 33.5, աղյուսակ 2) և այն փաստի վրա, որ 40-ից բարձր շեմային ցիկլերում ախտորոշվել է սնկային որոշ այլ տեսակների ոչ սպեցիֆիկ ԴՆԹ: Այս մոտեցմամբ, C. coccodes ԴՆԹ-ի զգալի ներկայությունը հայտնաբերվել է պալարների 5 նմուշներում, որոնք աճել են Կոստրոմայի, Մոսկվայի, Կալուգայի մարզերում և Կրասնոդարի շրջանի Յիսկի շրջանից մեկ լոլիկի տերևում (աղյուսակներ 4, 5):
Աղյուսակ 4. Colletotrichum կոկոդների հայտնաբերում կարտոֆիլի պալարների վրա *
Նմուշի համարը | Կարտոֆիլի բազմազանություն | Աճի տեղը | C. կոկոդների հայտնաբերում | Շեմային ցիկլ |
---|---|---|---|---|
1 | Կարմիր կարմիր գույն | Կոստրոմայի շրջան | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | Սանթե | Մոսկվայի շրջան | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhուկովսկին շուտ | Մոսկվայի շրջան | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | Մոլի | Կալուգայի շրջան | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | Ֆանտազիա | Կալուգայի շրջան | - | |
15 | Գալա | Նիժնի Նովգորոդի շրջան | - | |
16 | - |
Նշում. * Բոլոր նմուշներում ԴՆԹ-ի քանակը 50 նգ էր:
Աղյուսակ 5. Լոլիկի տերևների վրա Colletotrichum կոկոդների հայտնաբերում *
Նմուշի համարը | Աճի տեղը | C. կոկոդների հայտնաբերում | Շեմային ցիկլ |
---|---|---|---|
1 | Կրասնոդարի երկրամաս, Crimeanրիմի շրջան | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | Կրասնոդարի երկրամաս, Եիսկի շրջան | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* Բոլոր նմուշներում ԴՆԹ-ի քանակը 50 նգ էր:
Մեր կողմից ստեղծված փորձարկման համակարգը զգայունությամբ և առանձնահատկությամբ չի զիջում բրիտանացի հետազոտողների (Cullen et al., 2002) մշակած համակարգին և հարմար է բույսերի նմուշների վերլուծության համար: Սերմնաբջիջների վերլուծության համար դրա կիրառումը հնարավորություն տվեց պարզել C. coccodes ԴՆԹ-ն պալարներում ՝ առանց վնասների արտաքին նշանների, և հաջողությամբ վերլուծել տերևների վարակը:
Ռուսաստանում մինչ օրս չի իրականացվել կարտոֆիլի պալարի վերլուծություն C. կոկոդներ վարակելու համար: Մեր առաջին ուսումնասիրությունը ցույց տվեց, որ Ռուսաստանի Դաշնության տարբեր մարզերում աճեցված 16 սերմնահեղուկի պալարներից 5-ը պարունակում են C. կոկոդներ: Սա ցույց է տալիս, որ կարտոֆիլի պալարների սեւ բիծը կարտոֆիլի տարածված հիվանդություն է Ռուսաստանում, և կարտոֆիլի բերքի ծավալը և որակը նվազեցնելու գործում դրա դերը թերագնահատված է:
Լոլիկի տերևների վերլուծությունը պարզել է, որ Կրասնոդարի երկրամասի Յեյսկ թաղամասի մեկ տերևում կա C. coccodes ԴՆԹ-ի զգալի ներկայություն: Ավելի վաղ, Ռուսաստանի հարավում լոլիկի դաշտերը բրիտանական փորձարկման համակարգի միջոցով ուսումնասիրելիս (Cullen et al., 2002), հայտնաբերվել էին C. կոկոդներ պարունակող տերևներ, իսկ որոշ դաշտերում ՝ C. կոկոդներով վարակված տերևների մեծ մասը (Բելով և ուրիշներ, 2018): Կրասնոդարի և Պրիմորսկի երկրամասերում, Մոսկվայի մարզում, մենք հայտնաբերեցինք լոլիկի պտուղներ, որոնցից մեզ հաջողվեց մեկուսացնել C. կոկոդների մաքուր մշակույթները: Հնարավոր է, որ C. coccodes- ը լոլիկի վրա շատ ավելի տարածված է Ռուսաստանում, քան այժմ հավատում են, և դրա վնասակարությունը նույնպես թերագնահատված է:
Այսպիսով, մինչ օրս բավարար տեղեկատվություն է կուտակվել կարտոֆիլի և լոլիկի վրա C. կոկոդների լայն տարածման վերաբերյալ:
Կարտոֆիլի և լոլիկի հիվանդությունների զարգացման մեջ այս բորբոսի դերը ավելի լավ հասկանալու համար անհրաժեշտ է վերահսկել դրա տարածվածությունը Ռուսաստանում, ուսումնասիրել հողի և սերմերի ինֆեկցիաների դերը և պահեստավորման ընթացքում կորուստների մեջ սեւ կետի դերը: PCR ախտորոշման օգտագործումը կարող է էապես նպաստել այս աշխատանքին, և երկու փորձարկման համակարգերի միաժամանակյա օգտագործումը էապես կբարձրացնի վերլուծության ճշգրտությունը:
Այս աշխատանքին աջակցում էր Ռուսաստանի Գիտական Հիմնադրամի թիվ 18-76-00009 դրամաշնորհը:
Հոդվածը տպագրվել է «Միկոլոգիա և բուսաբանություն» ամսագրում (հատոր 54, թիվ 1, 2020):